方法一：最便捷的方法是“切块转移”，使用消毒手术刀或小铲将一大块琼脂从旧培养皿移到新的培养皿。琼脂块中通常会有数百条秀丽线虫。线虫会从旧的琼脂块中爬出来，自己挪到新盘子的菌苔上。这种方法对于转移钻入琼脂，或难以单独挑出(如在没有食物的平板上)。切块的方法适用于转移纯合的线虫，但假如线虫群是杂合的，或者是线虫必须要通过杂交来维持，这个方法是不可取的。

方法二：使用已被切割成2.5cm宽，5-7.5cm长，消毒过的滤纸来转移线虫，把滤纸轻轻地放在培养皿上，滤纸在变潮湿之后会粘上线虫。再将滤纸放在全新的NGM盘子上，线虫会主动着陆在新的NGM板上。最后将滤纸丢弃即可。此方法适用于转移纯合的线虫，但假如线虫是杂合的，或者线虫是必须要通过杂交来维持，这个方法是不可取的。

方法三：是用挑虫针挑取线虫。挑虫针制作简单，将长约2.5cm，直径3mm的铂金丝插入转液管的顶端。铂金丝加热和冷却很快，可以经常在酒精灯上加热(转移线虫时)，以避免染菌。挑虫针的末端可以用锤子稍微弄平，然后用锉刀锉平，去除锋利边缘，尖锐的铂金丝可能会在琼脂上戳洞，甚至戳穿，戳死线虫。

铂金丝的尖端可以根据个人喜好来制作。有些人喜欢平头，也有人喜欢轻微弯曲的钩头。使用挑虫针初期需要勤加练习，避免在琼脂上戳洞。线虫爬进洞里，就很难观察或是挑起它们。

方法一：慢慢下降挑虫针的尖端靠近线虫，轻轻将挑虫针尖扫过线虫侧身，把线虫挑起。

方法二：首先用挑虫针尖端底端蘸取一团OP50，然后用带有OP50的pick轻且快速地碰触线虫，通过OP50的粘性将线虫粘住。这个方法的优点是一次同时可以挑出好几只线虫。但需要注意虫子留在挑虫针上太久会变干并脱水死亡。

秀丽隐杆线虫通体透明的，可以使用配有透射光源的正置显微镜观察。CGC使用的是徕卡M5A型或蔡司SV6型。线虫实验室广泛使用的是标准10X目镜和从0.6X到5X(总放大率为6X到50X)的物镜。

将挑虫针的尖端轻轻靠近琼脂的表面，并保持一段时间，让线虫爬出挑虫针。

秀丽隐杆线虫的培养温度在16℃到25℃之间，最适宜的温度是在20℃下。秀丽隐杆线虫在25℃下的生长速度是16℃下的2.1倍，在20℃下的生长速度是16℃下的1.3倍(Maniatis等，1982年)。在计划实验时，需要注意这种生长周期的变化。

注意特定的培养需要(例如温度敏感性或基因缺陷)，并做相应的冻存。这些线虫特殊的培养信息在CGC上可以查询到。

线虫不一定要放在加盖的培养皿中，培养皿最终会变干，但是如果你在培养皿干燥之前转移线虫，就没问题了。如果你确实把盘子放在有盖的容器里，一定要注意观察湿度是否过高。这种情况并不常见，但在这种情况下，线虫有可能从一个培养皿爬行(或被一滴水携带)到另一个，导致不同的虫株混合。

倒板或转移线虫时，最好快速完成培养皿盖子开关的时间。这减少了污染。如果培养皿上有霉菌，小心地用一条石蜡薄膜包裹盘子并处理掉。不要从受污染的盘子上取下盖子反复使用，会有染菌的风险。其他盘子。如果不得不从受污染的板上转移线虫，请关注我们之后裂解染菌线虫的专题。

用菌株名称和日期标记培养皿底部。不要只给封面贴标签，因为盖子可能不小心与底盘分离。

蛋白胨（peptone）2g，琼脂16g，NaCl 2.4g，置于洁净1000ml玻璃三角瓶，加入1M磷酸缓冲液20ml，蒸馏水定容至800ml（此混合物为初始培养基），120℃高压蒸汽灭菌30min，之后置于55℃水浴锅中冷却。

1M磷酸钾缓冲液的配置方法为：称取108.3g KH2PO4和35.6g K2HPO4，溶于1000ml蒸馏水中，调节pH值到6.0即可。

依次加入5mg/ml胆固醇（乙醇溶解，不灭菌）0.8ml，高压灭菌的1M MgSO4，1M CaCl2各0.8ml，摇匀即得到完全培养基。

使用无菌技术，用移液管将约0.05毫升大肠杆菌OP50液体培养物涂在中小型NGM平板上，或0.1毫升涂在大型NGM平板上。如果需要，可以使用移液管吸头或玻璃棒分散液滴。会形成一个更大的菌苔，这有助于观察线虫。注意不要把菌一直铺到盘子的边缘；如果菌延伸到盘子的边缘，蠕虫可能会爬上盘子的边缘，变干并死去。让大肠杆菌OP50菌苔在室温或37℃下生长8小时(在转移线虫之前将平板冷却至室温)。NGM平板将保持2-3周。

秀丽隐杆线虫通常在实验室中以大肠杆菌OP50菌株作为单一的食物来源(布伦纳，1974)。大肠杆菌OP50是尿嘧啶营养缺陷型，只能在NGM平板上生长。为了使让线虫更容易观察，同时更好地繁育，需要一定厚度的菌苔。大肠杆菌的起始培养物OP50可以从上源生科或是CGC获得，也可以从虫板中回收。

沾取op50菌液在无抗板上画单斑（封口膜封口，37度培养12小时或者过夜），取出OP50单斑的平板，用无菌枪尖挑取一个克隆到50ml LB培养基中，于37℃摇床12小时或过夜振荡培养（220rpm）。培养好的OP50菌液在4℃可以保存一个月。 

2．菌液测试

1）将扩增好的OP50菌液摇匀，用移液器吸取约20μl至NGM平板中

2）菌液测试板上有数字标记，代表不同瓶菌液。菌液被吸收后的平板倒置，于37℃过夜培养。整个过程严格无菌操作。

3）37度培养两天后，或者是在室温培养三天后，观察菌斑状态是否合格。

4) 观察是否有杂菌，若测试板上长出大量杂菌（菌落突起，色泽亮丽），需重新摇菌。

秀丽隐杆线虫偶尔会被其他细菌，酵母或霉菌污染。大多数污染物不会伤害线虫。（其实秀丽线虫喜欢攀爬一些真菌，并在菌丝中来回爬行！）

但是当你的线虫处于干净状态时，你更容易获得表型并转移线虫。

处理染菌线虫十分简单。

研究人员可以通过切块和连续转移去除霉菌，使线虫从污染物中爬出。细菌和酵母污染则可以通过用次氯酸盐溶液处理去除，次氯酸盐溶液将杀死污染物和虫卵。

除去秀丽隐杆线虫板子上的染菌

方法一：

1.用酒精灯给手术刀或抹刀消毒，并从污染的板子中取出一大块琼脂。

2.将琼脂块放在干净的平板边缘。让蠕虫从大块中爬出来，穿过OP50菌苔到平板的另一侧。

3.一旦线虫到达板的另一侧，用挑虫针把线虫移到干净板子的边缘。

4.重复第3步

方法二：

试剂：5摩尔/升氢氧化钠溶液，5%次氯酸钠溶液。

步骤：

1. 染菌的板子中有许多吃雌雄同体线虫，用移液管将无菌蒸馏水扫过板子若干次，使卡住菌苔里的线虫和虫卵松动。

2.用5摩尔/升氢氧化钠溶液，5%次氯酸钠溶液以1:2的体积比例混合。

3.将溶液加入装有线虫的离心管。

4.将离心管摇匀几秒。

5.将试管在台式离心机中以1300 xg转速旋转30秒，以沉淀虫卵。

6.抽吸至0.1ml。

7.添加无菌水至5ml，摇晃几秒钟。

8.重复步骤5-6.

9.使用移液枪将剩余0.1毫升液体中的虫卵转移到接种有大肠杆菌OP50菌苔的干净NGM平板边缘。

10. 第二天，卵将孵化出来，幼虫将爬进大肠杆菌OP50草坪。将孵化出来的幼虫转移到一个干净的新NGM盘子里。

秀丽隐杆线虫可以冷冻并无限期储存在液氮（-196°C）中（Brenner，1974）。成功冷冻的关键是使用处于正确发育阶段的线虫，向冷冻培养基中加入甘油，并逐渐冷却至-80℃。刚刚处于饥饿状态的幼虫（L1-L2阶段）最适合冻存，成虫、和dauers状态的虫不适宜冻存。最好使用几块刚刚耗尽大肠杆菌OP50菌苔并含有大量L1-L2的线虫板子。冷冻溶液中要加入15％甘油。在冷冻期间，每分钟温度降低1℃是理想的。这可以通过将线虫放置在-80℃的聚苯乙烯泡沫塑料容器中来实现。在-80°C下存放12小时或更长时间后，应将冻存管转移到永久冷冻的位置，以便进行长期储存。

线虫冻存试剂：

S Buffer [129 ml 0.05 M K2 HPO4 , 871 ml 0.05 M KH2 PO4 , 5.85 g NaCl]

S Buffer+30%甘油（高压灭菌30分钟）